Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1M-糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现呼吸道自身免疫球蛋白到经常出现1标准型冠心病诊疗征状的令人满意百余人在幼儿当中期就有极佳的刻画，多个呼吸道自身免疫球蛋白HIV的幼儿当中有70%在血清转换后10年内患上冠心病，而随访15年的幼儿这一%上升到84%。值得注意之下，占有诊疗1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的得病的系统设计还没有得不到合理的分析。

越来越多的人开始应用于仍须系统设计来表述1标准型冠心病的令人满意：群纤在经常出现多种呼吸道自身免疫球蛋白时转入第1阶段，经常出现呼吸道素异常时转入第2阶段，经常出现征状时转入第3阶段。一些多发呼吸道自身免疫球蛋白HIV的群纤，在1期和2期，令人满意较慢，并工业发展为得病的1标准型冠心病。我们之前刻画了一两组在首次验证到多种呼吸道自身免疫球蛋白样本后仅仅10年无冠心病的想像当中慢令人满意者，这两组病变人数极多，但特点颇为明确。随后，我们发现呼吸道自身蛋白特异性CD8+T蛋白反不宜在令人满意较快的病变当中基本不存在，但在未来会得病和与此相关的冠心病病变当中很容易验证到。这可能会表明，与令人满意病变值得注意，这些病变特异性的可调增强。

早期新发现，尽管可调性T蛋白(Treg)数量正常，但冠心病病变存在一些功能缺失，其当中包含对IL-2的反不宜能够下降。此外，冠心病病变当中的效不宜CD4+T蛋白可能会对可调不够具抵抗性，表现为效不宜T蛋白的抑止消散，自然产生的Treg和纤外产生的作用于Treg，以及蛋白年中的CD4+T蛋白当中IL-2反不宜消散。本分析的目的是刻画了CD4+可调性T蛋白(Treg)在一小群想像当中较快令人满意者当中的特点，他们的年龄为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以人群结合的纵向分析，在21岁所列确诊的病变亲属当中检测1标准型冠心病的小心主因。我们之前刻画了长期较快令人满意者的特点，他们维持多重呼吸道自身免疫球蛋白HIV极多于10年，但没有经常出现冠心病的诊疗征状，慢性或非顺利进行性免疫。随后，10名继续维持无冠心病并愿意提供大量尿液样本的较快令人满意者纳入T和B蛋白功能分析。在现有的分析当中，8名慢令人满意者(SP两组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身免疫球蛋白HIV。所有的大多数人都始终保持1标准型冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后挽回了呼吸道自身免疫球蛋白对某些蛋白的HIV反不宜，然而，一名病变现在始终保持2期仅仅6年，但没有经常出现诊疗征状，一名病变被病患为冠心病，该受试者72岁，在采集实验室样本时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在生物信息学当中对该丝氨酸顺利进行了另行指标。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多参数流式蛋白绝技和T蛋白抑止试验指标丝氨酸当中Treg的基频、遗传和功能。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无监督聚类分析，指标Treg遗传。

结果：与身心健康丝氨酸值得注意，来自慢令人满意纤的无意识CD4+T蛋白的监督聚类辨识，酪氨酸的无意识CD4+ Treg基频上升，与糖皮质激素作用于的TNFR关的蛋白(GITR)表达出来上升有关。一名HbA1c上升时的病变与令人满意较快者和反之亦然的对照两组值得注意，Treg五音不尽相同。功能新发现，与身心健康丝氨酸值得注意，来自较快令人满意纤的Treg介导的CD4+效不宜T蛋白抑止明显损害。表现为对效不宜CD4+T蛋白CD25和CD134表达出来的抑止上升。

平面图1 深入的遗传分析辨识，CD4+Treg亚标准型在慢令人满意配置文件当中上升。由FlowSOM转化的Treg室，挤满在来自所有丝氨酸的已逝CD4+CD45RA -蛋白上。根据标上物表达出来鉴定出10个元簇:无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标上转化的10个元簇的MST。每个结点象征性一个战斗群(100个战斗群)，巨大的元战斗群(10个元战斗群)在结点两组周围上色。每个结点当中的饼平面图回不宜单个标上的表达出来级别。(b)每个元聚类的热平面图，以辨识整纤标上表达出来。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转化平面图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的孔洞。(e-l)相对于稀土元素为每个metacluster罐该线平面图(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP两组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T蛋白(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T蛋白(l)。粉红色带子象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推字母秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 应用于CITRUS的预测模标准型确认，Treg基频的上升是令人满意较快的标志。分级门控(a - f)和大豆分析(g-k)比较SP大多数人和反之亦然的HD大多数人在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的象征性性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来顺利进行分离，实时FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及丝氨酸SP 606(粉红色)当中CD25+ cd127的基频统计平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控次子集的罐该线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度图例，对角突出的簇被辨识为SP和HD配置文件之间的不同。(j)罐该线平面图辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组当中，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相对于稀土元素(%)。(k)插值辨识每个簇的遗传(白色)和Treg标上相对于表达出来与背景表达出来(白色);上列，存储器Treg_3;一个大几天后，存储器Treg_4。背景与所有其他簇当中标上的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推字母秩检验

平面图3 与身心健康献血者值得注意，令人满意较快者无意识treg的GITR上升。每个无意识CD4+T蛋白元簇(无意识T蛋白_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T蛋白;HLA-DR + GITR +无意识T蛋白;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表达出来标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的表达出来热平面图(sp606不包含在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇当中所有HD(蓝灰色)、所有SP(白色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表达出来串连，辨识插值(c)和统计平面图(d)。Wilcoxon以此类推字母秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有丝氨酸包含，p< 0.05(白色)丝氨酸SP 606和反之亦然的HD不包含在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(白色)和SP 606(粉红色)串连，辨识插值(e)和统计平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推字母秩检验

平面图4 来自较快令人满意的CD4+ treg蛋白管控效不宜CD4+T蛋白的能够下降。SP两组用白色的该线和带子回不宜，HD两组用黑色的该线和带子回不宜，粉红色的该线/带子回不宜丝氨酸sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白顺利进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按判读的%滴定。用抗CD3 /28微珠转化蛋白，培植3翌日顺利进行流式蛋白绝技验证。(a-d)与CD4+反之亦然者相对于不宜的treg培植(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑止百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百份。应用于HIV对照(酪氨酸的响不宜蛋白不含treg)量度抑止百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 效不宜CD4+T蛋白对较快令人满意的T蛋白转化的抑止不够引人注目。SP两组用白色的该线和带子回不宜，HD两组用黑色的该线和带子回不宜，粉红色的该线/带子回不宜丝氨酸sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白顺利进行分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按判读的%滴定。用抗CD3 /28微珠转化蛋白，培植3翌日顺利进行流式蛋白绝技(CD25反染)和蛋白因次子分析。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑止百分百余人(b)。(c,d) CD25抑止百分百余人(c)和CD134抑止百分百余人(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植当中的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得出论点的论点是，来自较快令人满意次子的转化无意识CD4+Treg在GITR表达出来当中得不到了扩大和丰富，忽视了进一步分析Treg在1标准型冠心病风险群纤当中的异质性的必要。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28